鉴别药品质量快速有效的方法 ----薄层色谱法

（国家食品药品监督管理局“药品快速鉴别手册”薄层鉴别第一起草人）

2007/12/25 9:22:17作者：刘树春 天津市药品检验所　摘自：全国药品打假信息论坛　编辑：白海燕

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    薄层色谱法是一种经典的分析方法由于具有快速、灵敏、高效等特点，这种方法广泛用于药品和毒品的鉴别，中草药有效成分的分离、提纯和研究。特别是用作药品的鉴别方法，也是被各国药典、药品标准所收载，是一种被广泛应用的法定检验方法。
    中国药典收载的薄层色谱方法，是其主要附录之一，是一通用的方法。在各品种项下所收载的方法对薄层色谱条件如薄层吸附剂、展开剂、检测方法、都有具体规定。按法定方法进行检验，其检出结果具有法定性质。在药品质量检查工作中如具备所要求的条件，可按药典方法操作，据以判定检品的真伪。中国药典最近两版收载TLC鉴别的品种数量见下表： 
    1992年4月世界卫生组织（WHO）和国际制药协会（IFPMA）的国际研讨会上，针对市场上伪劣药品泛滥问题制定了一系列相应的对策，开发研究快速检验方法是其中之一，日本国际厚生事业团（JICWELS）专门设立研究项目，其目的就是开发简单快速的检验方法，并利用最简单的仪器设备，可在现场进行操作检查的快速检验方法。
    在日本国立卫生试验所和天津市药品检验所专家的共同努力下建立了一套比较完整并行之有效的薄层色谱快速鉴别方法。
   这各方法传承了薄层色谱快速准确的特行之外还增加了简便特点。
   这个方法由于是一通用的、开放性的方法，所以应用范围十分广泛。
   在推广薄层色谱快速鉴别方法我们主要解决了几个问题：
v 1、薄层板的国产化问题
v 2、安瓶装展开剂和溶剂问题
v 3、对照样品问题
v 4、处方不同会造成结果不同的问题
   实验条件 
v 薄层板  采用硅胶GF254预制薄层板（5×10cm，铝基）密封保存，可不活化直接作用。
v 毛细管  点样用毛细管（2ul），可固定于点样笔中，便于点样。
v 展开缸  一般采用圆桶形展开缸，密封性要好，在使用时，首先加入展开剂并缓缓加入点好样品
                  的薄 层板，盖严，水平放置饱和约10分钟，然后垂直展开。
v 检测 ： 为求简便快速，采用荧光检测和碘蒸气显色。推荐使用254nm紫外光灯。
v 展开剂  配制三种专用展开剂，以醋酸乙酯为主，碱性、酸性、中性展开剂。
v 展开剂1：醋酸乙酯：无水乙醇：氨水（50：5：1）
v 展开剂2：醋酸乙酯：无水乙醇：冰醋酸（50：5：1）
v 展开剂3：水饱和的醋酸乙酯
v 供试品溶液的制备：  制备供试品溶液首先要考虑到被测样品的溶解性，是水溶性还是脂溶性，依此来决定是用乙醇、甲醇或氯仿作为溶剂。对片剂或胶囊，一般取一片（或1粒），如标示含量在25mg以下，可取2片（或2粒）置乳钵中（或倒出胶囊内容物）研细，加溶剂5ml，继续研磨，使主成分溶解，静置，取上清液2ul作为供试品溶液。注射剂样品可直接作为供试品溶液。
     对照样品溶液的制备：  对照样品或称阳性对照样品是最后结果判断的关键，在快速鉴别中，由于它采用的是非法定检验方法，只是对可疑样品的初步判断，所以一般可采用经检验合格的正常样品作对照，在相同的条件下作薄层色谱比较，容易得出结论，在对照样品溶液的制备中应注意要与供试品一致。
     目前发现抗生素类：硫酸丁胺卡那霉素、羟氨苄青霉素、氨苄青霉素、头孢呱酮、头孢他啶、四环素、硫酸庆大霉素、硫酸链霉素、硫酸卡那霉素、盐酸林可霉素等在上述三种展开剂中，其Rf值绝大部分均为0，显示均不能展开，因而需另行选用其他展开剂系统。 
    应用实例
v 复方氨酚烷胺胶囊（快克） 
v  以5ml氯仿为溶剂；
v 水饱和醋酸乙酯为展开剂；
v 展开后在254nm紫外光灯下检视；
v 供试品未见斑点；
v 对照样品显Rf值= 0.26和Rf值= 0.65两个斑点 
     应用实例
v 芬必得缓释胶囊 
v  以5ml氯仿为溶剂；
v 水饱和醋酸乙酯为展开剂；
v 展开后在254nm紫外光灯下检视；
v 供试品未见斑点；
v 对照样品显Rf值= 0.89斑点
     应用实例
v 复方氨酚烷胺片（感康）：
v 以5ml甲醇为溶剂；
v 醋酸乙酯–无水乙醇–冰醋酸（50：5：1）为展开剂；
v 展开后在254nm紫外光灯下检视；
v 供试品未见斑点
v 对照样品显Rf值= 0.26和Rf值= 0.65两个斑点。 
    应用实例
v 地奥心血康胶囊  为中药制剂，由于中药多采用脂溶性溶剂提取，因此选择脂溶性溶剂。
v 以5ml氯仿为溶剂；
v 水饱和醋酸乙酯为展开剂；
v 展开后在254nm紫外光灯下检视；
v 供试品未见斑点；
v 对照样品显Rf值= 0.59斑点。 
    应用实例
v  阿莫西林胶囊  为抗生素类药品，虽然采用上述3种展开系统均不能将主成分阿莫西林从点样原点展开，对于劣药可能不适用，但是对一般假药还是适用的。将供试品和对照样品分别处理后，点样，展开，挥干，置254nm紫外灯下检视，对照样品在点样原点处显荧光，如果供试品在点样原点处不显荧光，则需要对可疑样品抽样做进一步检验。 
    应用实例
v  醋酸地塞米松片 
v  由于醋酸地塞米松原料价格较贵，前期市场上发现有用醋酸泼尼松代替或部分代替醋酸地塞米松的现象。采用本方法，可简便快捷的检出伪劣药品。醋酸地塞米松在丙酮中易溶，在甲醇或无水乙醇中溶解，因此选择水溶性溶剂。将检验合格的醋酸地塞米松片作为对照样品。
       应用实例
v 以5ml甲醇为溶剂；
v 醋酸乙酯–无水乙醇–氨水（50：5：1）为展开剂；
v 展开后在254nm紫外光灯下检视；
v 供试品显Rf值= 0.90斑点（为醋酸泼尼松的斑点）；
v 对照样品显Rf值= 0.80斑点。 
     实际问题
v 当对照样品与被检测样品不完全一致时应如何处理？
v 1、规格不一样。
v    在溶解样品前进行处理或在点样时采取多次点样的方法。
v 2、生产厂家不同。
v    采取点第三个点的方法。 
     体会
v 1、目前基层药品监督人员缺乏药品的基础知识。
v 2、大家对检验结果的法定性期望值过高。
v 3、试验器材供应尚不畅通。
v 4、缺乏技术支持。
v 5、信息沟通不够，工作得不到总结。

本文关键词：,鉴别,药品质量,快速有效薄层色谱法
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